1、实验原理

用乙醚和石油醚抽提样品的碱水解液，通过蒸馏或蒸发去除溶剂，测定溶于溶剂中的抽提物的质量。

2、仪器和试剂

2.1仪器

万分之一天平（见图1），恒温水浴锅（见图2），鼓风干燥箱（见图3）等。

2.2试剂

95%乙醇，乙醚，石油醚（沸程30℃～60℃），氨水，刚果红。

图1万分之一天平

图2恒温水浴锅

图3鼓风干燥箱

3、操作步骤：

3.1称量样品

保证样品均匀稳定，有果粒的需要用匀浆捣碎机或榨汁机打碎（图4），称取试样10g（精确至0.g）（图5）于抽脂瓶（罗兹管）中（图6），加入2.0mL氨水（图7），充分混合后立即将抽脂瓶放入65±5℃℃的水浴中，加热15min到20min，不时取出振荡（图8）。取出后，冷却至室温。静止30s后可进行下一步骤(图9)。

图4摇匀样品

图5称量样品

图6将样品倒入抽提瓶中

图7加入氨水

图8在65±5摄氏度水浴15-20分钟

图9冷却至室温，静置30s

3.2加入抽提剂抽提

加入10mL乙醇，缓和但彻底地进行混合，避免液体太接近瓶颈。如果需要，可加入两滴刚果红溶液，加入25mL乙醚，塞上瓶塞，将抽脂瓶保持在水平位置，采用手动振摇方式按约次/min振荡1min（一般摇匀次），但均应注意避免形成持久乳化液。将抽脂瓶冷却后小心地打开塞子，用少量的乙醚和石油醚混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶再加入25mL石油醚，塞上塞子，将抽脂瓶保持在水平位置，采用手动振摇方式按约次/min振荡1min（一般摇匀次），轻轻振荡30s（图10）。采用将抽脂瓶静止至少30min，直到上层液澄清，并明显与水相分离，小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶将上层液尽可能地倒入已准备好的加入沸石的脂肪收集瓶（一般为ml广口瓶）中，避免倒出水层（图11）。

图10加入抽提剂并摇匀

图11等待分层后，倒入上层液

3.3再次加入抽提剂抽提

加入5mL乙醇，用乙醇冲洗瓶颈内壁，加入15mL乙醚，塞上瓶塞，将抽脂瓶保持在水平位置，采用手动振摇方式按约次/min振荡1min（一般摇匀次），将抽脂瓶冷却后小心地打开塞子，用少量的乙醚和石油醚混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶再加入15mL石油醚，塞上塞子，将抽脂瓶保持在水平位置，采用手动振摇方式按约次/min振荡1min（一般摇匀次），轻轻振荡30s。采用将抽脂瓶静止至少30min，直到上层液澄清，并明显与水相分离，小心地打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，再次使冲洗液流入抽脂瓶将上层液尽可能地倒入脂肪收集瓶（一般为ml广口瓶中），避免倒出水层。

3.4处理抽提物，并进行恒重称量

以沸水浴蒸发至干来除掉脂肪收集瓶中的溶剂，蒸干溶剂后将脂肪收集瓶放入±2℃℃的烘箱中加热1h，取出脂肪收集瓶，冷却至室温，称量，精确至0.1mg。重复此操作，直到脂肪收集瓶两次连续称量差值不超过0.5mg，记录脂肪收集瓶和抽提物的最低质量。

图12沸水浴蒸干溶剂

3.5结果计算

样品中脂肪含量按式计算：

式中：

X——样品中脂肪含量，单位为克每百克（g/g）；

m——样品的质量，单位为克（g）；

m1——测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量，单位为克（g）；

m2——脂肪收集瓶的质量，单位为克（g）；

m3——空白试验中，脂肪收集瓶和抽提物的质量，单位为克（g）；

m4——空白试验中脂肪收集瓶的质量，单位为克（g）。

3.6精密度：

在重复性条件下获得的两次独立测定结果之差应符合：

脂肪含量≥15%，≤0.3g/g；

脂肪含量5～15%，≤0.2g/g；

脂肪含量≤5%，≤0.1g/g。

4、注意事项

4.1为了减弱系统误差进行空白控制

空白试验与样品检验同时进行，使用相同步骤和相同试剂，但用10mL水代替试样，对于存在非挥发性物质的试剂可用与样品测定同时进行的空白试验值进行校正。抽脂瓶与天平室之间的温差可对抽提物的质量产生影响。在理想的条件下（试剂空白值低，天平室温度相同，脂肪收集瓶充分冷却），该值通常小于0.5mg。在常规测定中，可忽略不计。如果全部试剂空白残余物大于0.5mg，则分别蒸馏mL乙醚和石油醚，测定溶剂残余物的含量。用空的控制瓶测得的量和每种溶剂的残余物的含量都不应超过0.5mg。否则应更换不合格的试剂或对试剂进行提纯。

4.2试剂注意事项

氨水：无色有强烈刺激气味的液体，可以刺激眼睛和烧伤皮肤，引起呼吸困难和强烈窒息性咳嗽，取用时一定要带口罩，手套，在通风橱中进行移取操作，加入氨水的作用为溶解试样中的蛋白酶等物质，保证提取粗脂肪的量；

95%乙醇-------易燃，遇明火、高热可引起燃烧爆炸；

乙醚------易挥发，长时间接触可以造成皮肤干燥龟裂，蒸汽可以与空气形成爆炸混合物，遇明火高温极易燃烧爆炸，水浴锅控制在70度以下；

石油醚----易挥发，可以引起周围神经炎，对皮肤有强烈刺激性，蒸汽可以与空气形成爆炸混合物，遇明火高温极易燃烧爆炸,水浴锅控制在70度以下；

刚果红------配制方法为将1g刚果红溶于水中，稀释至mL，使用时可在抽提瓶中滴入2-3滴，可致癌，也可用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。